Wat is 2D -gelelektroforese?

Tweedimensionale (2D) gelelektroforese is een methode die wetenschappers gebruiken om eiwitmengsels uit elkaar te halen en te analyseren door eerst banden van eiwitten langs twee verschillende assen te scheiden.Het is een techniek die meestal wordt gebruikt bij het omgaan met gecompliceerde of dikke mengsels van eiwitten, vaak met overlappende afmetingen van eiwitten.2D-gelelektroforese verschilt van eendimensionale gelelektroforese omdat de vorige methode de scheiding van eiwitten gebruikt op basis van twee verschillende eiwitkenmerken, terwijl eendimensionale gelelektroforese meestal eiwitten scheidt op basis van een enkele kenmerk, zoals eiwitgrootte.

gel elektroforese is vaakGebruikt in onderzoek om moleculen te scheiden door gebruik te maken van het feit dat veel biologische moleculen, zoals DNA, een elektrische lading hebben.Dit feit kan in het voordeel van wetenschappers worden gebruikt, omdat geladen moleculen kunnen worden gescheiden door grootte door een poreus substraat zoals agarose door een spanningsgradiënt toe te passen over een poreuze, ionische gel.Na verloop van tijd zullen moleculen door deze gel gaan, naar de lading die tegengesteld is aan de natuurlijke lading van het molecuul.Kleine moleculen en zwaar geladen moleculen bewegen beide sneller dan grote moleculen of eiwitten die zwak geladen zijn.In 2D -gelelektroforese, na het scheiden van eiwitten door een enkel kenmerk, dat een gradiënt creëert, kan een gel vervolgens zijwaarts worden gedraaid om die voorheen resulterende banden te scheiden op basis van een tweede kenmerk.

2D -gelelektroforese gebruikt vaak moleculaire ladingen van eiwitten als eenKenmerk waarmee eiwitaggregaten kunnen worden gescheiden in enkele componenteiwitten.Eiwitmassa is een ander veel voorkomend kenmerk dat wordt gebruikt om eiwitten in 2D -gelelektroforese te scheiden.Nadat eiwitten op een gel zijn uitgevoerd door een enkele rijstrook in eendimensionale gelelektroforese, kan die gel vervolgens worden gesponnen in een centrifuge en de zwaardere eiwitten sneller naar beneden trekken dan de kleinere, minder massieve eiwitten.taggen.Eiwitscheiding op basis van een karakteristieke massa wordt ook gebruikt wanneer eiwitten worden getagd met andere moleculen.Deze techniek kan worden gebruikt met deze eiwitcomplexen omdat de getagde eiwitten gemakkelijker door een gel zullen vallen dan niet -geageerde eiwitten.

Hoewel veel scheidingsgels in laboratoria zijn gemaakt van agarose, kan eiwitscheiding door 2D -gelelektroforese het beste worden gedaan op polyacrylamidegels.Dit soort gels worden gebruikt in Western-blots en andere gebaseerde assays op eiwitgrote.Agarose wordt vaker gebruikt voor scheiding van DNA -segmenten.