Wat is peptide -zuivering?

Peptiden zijn kleine polymeren samengesteld uit aminozuren.Velen zijn biologisch actief als hormonen, gifstoffen of hebben andere vaardigheden.Dergelijke verbindingen worden vaak gebruikt in biologisch, medisch en chemisch onderzoek.Ze dienen ook als de bouwstenen van eiwitten wanneer de aantallen van hen aan elkaar zijn gekoppeld.Peptide -zuivering is een techniek die wordt gebruikt om grote hoeveelheden van een gewenst peptide te zuiveren, of om te helpen scheiden van peptiden die zijn gegenereerd door de digestie van eiwitten.

De zuivering van peptiden wordt bereikt door een techniek van chromatografie te gebruiken, een manier om verbindingen te scheiden die verbinden die bindenanders dan een fysieke matrix.Liquidchromatografie met hoge druk (HPLC) wordt vaak gebruikt voor peptide -zuivering.De peptide of peptiden worden aangebracht in een mengsel van oplosmiddelen die in de loop van de tijd verandert terwijl ze worden gepompt over een kolom met kleine kralen bij hoge druk.Verschillende peptiden elueren op verschillende tijdstippen en worden gedetecteerd door een monitor, vaak een UV -spectrofotometer.

Bij het uitvoeren van onderzoek naar peptiden is de sterkte van interesse vaak zeldzaam en kan niet worden gekocht bij chemische bedrijven.Als de structuur van het gewenste peptide bekend is, is het vaak gemakkelijker om chemisch te bereiden door peptidesynthese dan om de verbinding van natuurlijke bronnen te isoleren.Natuurlijke producten isolatie is notoir moeilijk.Synthetische peptiden worden in het algemeen gezuiverd door HPLC.

Een dergelijke chemische synthese kan ontmoedigend zijn voor een onafhankelijke onderzoeker die geen chemicus is.Vaak wordt deze taak uitgewerkt aan peptidesynthesebedrijven die gespecialiseerd zijn in deze technieken.Dit kan economischer zijn dan proberen het systeem helemaal opnieuw op te zetten in een laboratorium.Peptidebedrijven kunnen aangepaste peptiden maken die zijn afgestemd op de behoeften van de onderzoeker.

Een andere reden voor peptide -zuivering kan zijn wanneer een onderzoeker een eiwit heeft gezuiverd en probeert zijn identiteit te bepalen.Hij of zij kan het eiwit afbreken in peptidefragmenten, de fragmenten scheiden door zuivering en het fragmentatiepatroon van de peptiden hebben gedetecteerd door een massaspectrometer terwijl ze uit de kolom elueren.Deze techniek staat bekend als LC-MS, kort voor vloeistofchromatografie-massaspectrometrie.Het geeft het molecuulgewicht en de aminozuursamenstelling van de fragmenten en maakt vaak de identificatie van eiwitten mogelijk, als vergelijkbare of identiekeProbeer die te vinden met ongebruikelijke biologische activiteiten.Er is een heel veld genaamd peptidomimetica gewijd aan de studie van dergelijke nieuwe peptiden.Vaak worden door de computer gegenereerde sequenties ontworpen en wordt een peptidebibliotheek gesynthetiseerd die een reeks atypische peptiden omvat.Peptide -zuivering wordt gebruikt om individuele leden van deze bibliotheek te scheiden om zuiver peptide te bieden om te testen op biologische activiteit.Deze strategie is succesvol geweest in het genereren van ten minste één nieuw commercieel beschikbaar medicijn.

Veel van de biologisch actieve peptiden zijn interessant voor medisch gebruik.Verbindingen die commercieel worden gebruikt, zoals insuline, worden vaak geproduceerd door recombinante DNA -overexpressiesystemen die grote hoeveelheden van de gewenste verbinding genereren.Vaak worden de peptiden genetisch gemanipuleerd om de zuivering te vergemakkelijken door een soort tag aan hun fronten te hebben toegevoegd.Dit maakt het gebruik van affiniteitchromatografie mogelijk om het peptide te zuiveren.

Met dit type chromatografie is de tag een verbinding, zoals histidine, die een matrix van kralen bindt, zoals nikkel, gekozen vanwege zijn vermogen om de tag te binden.Ongewenste eiwitten en peptiden gaan over het algemeen door de kolom zonder binding.Het specifiek ontworpen peptide bindt meestal sterk aan de kolom.Nadat de verontreinigende eiwitten en peptiden zijn afgewassen, wordt het gewenste peptide geëlueerd door een verbinding die concurreert om binding aan Thij matrix.Men heeft dan een vrij pure voorbereiding van het gewenste peptide en de tag kan worden verwijderd door decolleté.