Wat is polyacrylamidegel?

Polyacrylamidegel is een oplossing die vaak wordt gebruikt in elektroforese, het proces van het scheiden van moleculen van verschillende grootte of deeltjes door ze door een gel te gooien en elektrische stroom toe te passen.Er zijn verschillende recepten voor polyacrylamidegel, maar het bevat meestal acrylamide, water, een buffer, ammoniumpersulfaat (APS) en tetramethylethyleendiamine (temed).Deze gel functioneert als een matrix die verbindingen scheidt op basis van hun lading en grootte;Hoe meer acrylamide in de geloplossing, hoe betere scheiding van kleinere moleculen.Typisch wordt deze gel gebruikt voor eiwit- en DNA -scheiding.

In elektroforese zorgt een elektrisch veld ervoor dat geladen deeltjes door een gel bewegen, waardoor als een zeef functioneert om de deeltjes van verschillende grootte te scheiden.De gel absorbeert elke warmte die wordt geproduceerd uit de elektrische stroom.Polyacrylamidegel wordt vaak gebruikt in deze procedure, maar agarose, een andere chemische stof die een vergelijkbare gel creëert, kan ook worden gebruikt.

Gels kunnen worden gemaakt van verschillende concentratie, met de hoeveelheid acrylamide variërend van ongeveer 6% tot 15%.Bij het mengen van de gel is de acrylamide niet -gefolymeriseerd, wat betekent dat het als enkele moleculen blijft.De toevoeging van andere chemicaliën die binding bevorderen, zoals Temed, zorgt ervoor dat de moleculen met elkaar verbinden en lange ketens vormen mdash;het poly -deel van polyacrylamide.

Het belangrijkste voordeel van polyacrylamidegel is dat het aantal koppelingsobligaties en hardheid kan worden gecontroleerd op basis van de initiële hoeveelheid acrylamide en Temed toegevoegd.Een belangrijke factor in de concentratie van acrylamides is de grootte van het geanalyseerde molecuul.Hoe kleiner de verbindingen die worden gescheiden, hoe meer acrylamide nodig is;Zeer kleine deeltjes worden gescheiden met behulp van de hoogste concentratie, 15 procent.

Acrylamide werkt door de hoeveelheid wrijving in de gel te regelen;De hardheid van de gel bepaalt de hoeveelheid wrijving.Verbindingen die groot zijn, zullen langzamer door de gel bewegen, omdat er van nature meer wrijving of weerstand is vanwege hun grootte.Kleinere verbindingen bewegen sneller, omdat er minder wrijving is.Om te voorkomen dat kleine verbindingen van de gel bewegen, wordt meer acrylamide toegevoegd om meer wrijving te creëren.

DNA -polyacrylamidegel wordt gebruikt om DNA -strengen van verschillende lengte te scheiden.Stukken DNA scheiden zich met slechts één nucleotide, de verbindingen waaruit elke streng bestaat.Om te weten welke stukken verwijzen naar de specifieke maten, wordt een standaard die fragmenten van een bekende grootte bevat vaak samen met monsters uitgevoerd.De DNA -stukken worden vervolgens vergeleken met de standaard en de grootte van de streng wordt bepaald.

Een vergelijkbare procedure wordt gebruikt om de grootte van eiwitten te bepalen, meestal die in bloed.Bloed bevat twee hoofdtypen eiwitten: globuline, een groot groot eiwit en serumalbumine, een zeer klein, negatief geladen eiwit.Scheiding met behulp van polyacrylamidegel wordt gebruikt om de hoeveelheid van elk type te bepalen.